ATP生物荧光肿瘤药敏检测技术在胰腺癌中的应用

ATP生物荧光肿瘤药敏检测技术在胰腺癌中的应用
王成锋赵平 张伟 张建伟
(中国医学科学院肿瘤医院 中国协和医科大学肿瘤学院腹部肿瘤外科，北京 100021)

　　【摘要】
　　目的　探讨ATP肿瘤化疗药敏实验(ATP tumor ehemosensitivity assay，ATP—TCA)对胰腺癌化疗药敏测定并指导临床个性化治疗的可行性。
　　方法　2003年～2006年，采用ATP—TCA法对40例胰腺癌进行药敏检测。
　　结果　对胰腺癌未发现强敏感药物和部分敏感药物，轻度敏感的药物有：吉西他滨(GEM)，氟尿嘧啶(5-FU)，紫杉醇(PTX)，奥沙利铂(OXA)；耐药的药物有：卡铂(DDP)，表柔比星(EPI)，长春瑞滨(NVB)，丝裂霉素(MMC)，拓扑替康(TPT)，卡莫司汀(BCNU)，多西他赛(TXT)。
　　结论　ATP—TCA法对胰腺癌进行药敏检测是可行的，但尚未发现胰腺癌强敏感和部分敏感的药物；ATP—TCA法指导胰腺癌个体化治疗的临床疗效有待进一步观察。

　　【关键词】胰腺癌； 药敏； 化学疗法

　　中图分类号：R735．9；R730．43 文献标识：A 文章编号：1009—6604(2007)11—1069—03
　　ATP—tumor Chemosensitivity Assay in Patients with Pancreatic Cancer 　Wang Chengfeng，Zhao Ptng．Zhang Wei，et a1．
　　Department of Abdominal Tumor Surgery．Cancer Institute＆ Hospita1．Chinese Academy of Medical Sciences＆ Peking Union Medical College，Beqing 100021，China
　　【Abstract】0hjective To investigate the feasibility of ATP—tumor chemosensitivity assay(ATP—TCA)for patients with pancreatic cancer and its clinical value in guiding therapies for individuals． M ethods From 2003 to 2006，ATP—TCA was used in 40 patients with pancreatic cancer in the Cancer Hospital，CA MS． Results The patients were highly or partially sensitive to none of the drugs used in this study，weakly sensitive to GEM ，5-FU，OXA and PTX，and resistant to DDP，EPI，NVB， MMC，TPT，BCNU，and TXT． Conclusions ATP—TCA is feasible for patients with pancreatic cancer．The drugs，to which pancreatic cancer is highly or partially sensitive， have not been found． Further investigations are needed to observe the clinical value of ATP—TCA in guiding therapies for individuals．
　　【Key Words】Pancreatic cancer； Drug sensitivity； Chemotherapy

胰腺癌恶性程度高，手术切除率仅10％ ，化疗是胰腺癌的主要治疗手段之一，但其单药或联合化疗的有效率约在20％ 一30％ ⋯ 。为探讨筛选胰腺癌高敏感性化疗药物的方法，我们采用先进的ATP生物荧光肿瘤体外药敏检测技术(ATP．TCA法)，对2003年1月一2006年1月在我院经手术切除的40例胰腺癌标本进行检测，现将初步结果报道如下。
　　1、临床资料与方法
　　1．1 一般资料
　　本组40例为2003年1月一2006年1月经手术和病理证实的胰腺癌，男28例，女12例。年龄17—75岁，平均43．5岁。肿瘤部位：胰头癌26例，胰体尾癌14例。手术方式：全麻下行胰十二指肠切除24例，胰头癌局部切除术2例，胰体尾切除11例，胰体癌局部切除3例。肿瘤直径2—5 cm。病理结果均为胰腺导管细胞腺癌，其中高、中、低分化腺癌和未分化腺癌分别为9例、16例、10例和5例，淋巴结转移阳性27例、阴性13例；临床分期：I期3例、
Ⅱ期28例、Ⅲ期9例。肿瘤切除后新鲜瘤组织标本2小时内送检，同时行病理和免疫组化检测。
　　1．2 方法
　　1．2．1 仪器设备德国Microplate Luminometer检测仪和生物荧光抗癌药物敏感检测试剂盒。
　　1．2．2 方法
　　　① 将新鲜瘤组织剪碎成1 mm 的碎块，然后加入组织消化酶(胰酶、胶原酶)消化2～3h，将消化后的细胞悬液通过160～200目的筛网，即得到单细胞悬液；
　　　② 肿瘤细胞接种于96孔板，设置不加药对照，在不同药物种类、同一药物不同药物浓度梯度下培养5～7 d；
　　　③ 提取ATP，利用生物荧光原理测定ATP含量，结果传输计算机；
　　　④ 软件分析各药物不同浓度抑制率，绘制抑制曲线，计算药物Ic 。(抑制半数癌细胞生长时的药物浓度)和Ic 。(抑制90％癌细胞生长时的药物浓度)，评估药物的敏感度；
　　　⑤100％ 药物浓度为按国人药物常规用量(毫克／体表面积)、在药物的药代动力学指导下测出的血液内峰值浓度。
　　1．3 ATP．TCA药物敏感和耐药的解读
　　　① 药物敏感定义：高AIJC(抑制曲线下面积)值，低Ic 。、Ic如和sI(敏感指数)值，高TGI(癌细胞生长抑制)值(表示癌细胞生存100％ 抑制)。
　　　② 药物耐受定义：低AUC值，高Ic 。、Ic 。和sI值，低TGI值(特别是在高测试浓度和弱剂量反应时)。
　　　③ 敏感度分级，定义为：强敏感，IC。。≤100％TDC(测试肿瘤药物浓度)和Ic 。≤25％TDC；部分敏感，IC 。>100％TDC和Ic 0≤25％TDC；弱敏感，Ic90≤100％TDC和IC s0>25％TDC；耐药，IC90>100％TDC和IC50>25％ TDC。
　　2、结果
　　40份胰腺癌标本进行了11种单药的药敏检测，每种药物检测的例数平均37．2例。未发现对胰腺癌强敏感的药物和部分敏感的药物；轻度敏感的药物有4种：吉西他滨(GEM)，氟尿嘧啶(5-FU)，紫杉醇(PTX)，奥沙利铂(OXA)；7种药物全部标本的检测结果为耐药，包括：卡铂(DDP)，表柔比星(EPI)，长春瑞滨(NVB)，丝裂霉素(MMC)，拓扑替康(TPT)，卡莫司汀(BCNU)，多西他赛(TXT)。部分药物的浓度和肿瘤生长抑制率见图1，轻度敏感的药物的单药敏感谱见表1。

表l 胰腺癌标本的部分单药敏感谱(％ 。份数)

　　3、讨论
　　对胰腺癌的治疗，目前多认为手术治疗为主，放、化疗效果差。应用人体新鲜肿瘤组织的体外药敏检测可以较好地指导临床用药、提高临床疗效、延长患者的生存期⋯ ATP．TCA法是测定细胞内源性ATP的含量，原理是荧光酶在有氧条件下，和荧光素结合后催化ATP转变成AMP，测定所产生的荧光强度计算活细胞的数量和活性。应用ATP-TCA法可评估该化疗药对肿瘤细胞的化疗效果，敏感性优于其他方法 。
　　3．1 临床筛选敏感药物
　　胰腺癌的化疗效果很差与肿瘤的个体差异性、多重抗药性(原发性、继发性)等因素有关，选择个体敏感药物进行个性化治疗是提高治疗成功率的关键。目前多数药敏试验采用的是噻唑蓝(MTT)比色法，进行单药检测。本检测结果显示，胰腺癌对目前临床常用的大部分化疗药物均不敏感，耐药机制目前尚不清楚，但肯定的是多药耐药基因(I~IDR1)及其编码的P一糖蛋白(P．gP)和其关系密切。进行检测的药物中只有GEM、5．FU、OXA、PTX为轻度敏感，同研究报道的MMC、5．FU和GEM对胰腺癌相对敏感基本相符 。吉西他滨和奥沙利铂是FDA批准上市用于治疗晚期胰腺癌的一线药物。奥沙利铂是第3代铂类化合物，抑制DNA作用强烈，结合速度快于卡铂、顺铂，细胞毒性强，消化道和肾毒性较两者降低。吉西他滨为核苷酸类似物，同胞嘧啶竞争，阻断DNA合成，两种药物对胰腺癌的有效率分别是22％ 和28％[4,5 J。
　　3．2 制定联合化疗方案
　　胰腺癌的单药化疗效果差，联合化疗成为治疗的主要途经，各种联合化疗的有效率在10％ ～20％ ，GEMOX是国内外有多个报道对晚期胰腺癌的化疗方案，Alberts等 报道使用GEMOX方案治疗晚期胰腺癌取得较好的效果，疾病无进展时间(TTP)达到4．53月。Louver等 报道的GEMOX的Ⅲ期临床试验结果表明，肿瘤缓解率(26．8％)、TTP(5．8月)、临床受益等方面有优势，耐受性好。联合化疗的临床结果同本研究的药敏结果相一致，表明体外药敏试验可以很好地指导临床选用敏感药物组成化疗方案。
　　3．3 肿瘤药敏试验在临床治疗中的意义
　　Link等 对原发性肝癌经药敏检测后治疗，敏感组生存明显优于耐药组。Cree 和Myatt 10]对恶性黑色素瘤进行检测后得出相似的结论。提示即使以往认为化疗不甚有效的肿瘤，也有可能存在一部分化疗效果较好的个体。药敏试验在临床的意义如下：
　　　①通过药敏确定对该肿瘤敏感的化疗药物，制订个体化的治疗方案；
　　　② 为非常规化疗肿瘤制订有效的治疗方案；
　　　③研究和确定新的化疗方案和治疗原则；
　　　④ 抗肿瘤药物的筛选和应用；
　　　⑤ 对现有化疗方案疗效的评估 。
　　总之，对胰腺癌除手术切除外尚无有效的辅助治疗方法。对其进行药敏检测以期获得有效的个体化治疗方案，不失为一有益的尝试；但迄今为止尚未见到大样本、随机对照、以体外药敏试验指导化疗的长期随访的结果。本组病例样本小，观察时间短；ATP—TCA法用于胰腺癌指导临床化疗的可行性和实用性，有待于大样本、长时间的前瞻性研究。

 　　参考文献